Voorsorgmaatreëls vir poliakrielamiedgelelektroforese

· poliakrielamiedgel moet deur akrielamiedmonomeer, polimerisasie-uitgangsmateriaal, katalisator en die regte sout- en buffermengsel saam.

· akrielamieden BIS (N,N'-metileendubbelakrielamied) is die monomeervormige gelmatriks.

· ammoniumpersulfaat begin kleefpolimerisasieproses. Die formulering van die gom vereis 'n 10% ammoniumpersulfaatoplossing wat in water voorberei is. Die meeste van die inligting dui op 'n behoefte aan aktiewe gebruik. Die 10%-oplossing kan egter vir 'n paar weke by 4℃ geplaas word sonder noemenswaardige verlies aan aktiwiteit. Maak tot 10 ml aan en gooi dit weg wanneer die gom nie saamsmelt nie.

Wenk: Die persentasie vanakrielamiedIn volgordebepaling is gom en proteïengom nie dieselfde nie. Indien voorafgemaakte akrielamied: BIS-oplossing gebruik word, maak seker dat jy die regte bottel kry.

· TEMED (N, N, N', N'-tetrametieletileendiamien) is 'n katalisator in 'n bruin bottel wat in die yskas geplaas word. Voeg dit by net voor die gom gegooi word.

· Poliakrielamied-elektroforese wat in elektroforese gebruik word, moet voor en na elke keer gewas word. Na elektroforese, was met 'n sagte borsel en lap in warm seepwater, spoel af met gedistilleerde water en laat droog word.

· vog en stof kan met hol polimeer veroorsaak. Maak die glasplaat skoon met glasskoonmaker en vee dit af met 'n sagte borsel voor elektroforese. Was met gedistilleerde water en droog deeglik af met 'n papierdoekie. Spoel met 70% etanol voor afvee met papier help om skoon te maak en droogtyd te versnel. Voeg monsters van akrielamied agtereenvolgens by: BIS, water, bufferoplossing, ammoniumpersulfaat, TEMED. Skud goed en gooi onmiddellik uit.

Dit is nie nodig om poliakrielamied voor polimerisasie te ontgas nie. (Akrielamied is voorheen in 'n vakuum geplaas om borrels te verwyder, want suurstof inhibeer polimerisasie.)

Horisontale gompunt voorbeeldpunte.

· Plaas 'n stuk swart papier in die onderste boks, swart agtergrond om 'n gaatjie vir die monster te maak sodat jy dit duideliker kan sien.
· gomtenk gevulde buffer, net oor die kolloïed.
· Indien die rand 'n lig het, skakel die ligte aan, laat die kolloïedlig skyn. Trek die monster in die pipet.
· met behulp van 'n outomatiese pipetteringsapparaat.
· in 10-200 mu 1 kan vloeistofbewegingspunt in die meeste punte op die monster gebruik word. Vir baie klein monstergate (minder as 10μ1) is die lang pipetkop wat vir volgordebepalingsgom gebruik word, geriefliker.

· pipettering net ondergedompel in die monster, inaseming van stadig bewegende vloeistof. Die monster kan klewerig voorkom met gliserien, en vinnige pomp kan lugborrels in die pipetkop trek.

· monsters na inaseming van pipetkop, sal vloeistofkop saggies teen die rand van die pyp beweeg of afveepapier suig vloeistofkop buite die druppels. Wees versigtig om nie die monster te suig nie.

Plaas die monster in die monstergat

· Pipetapparaat om 'n bietjie druk te handhaaf, laat die monsters effens beweeg oorloop vloeistofkop.
· die pipetkop wat in die buffer geplaas word, effens hoër as die puntgate, handhaaf positiewe druk. Die punt van die pipet kan in 'n klein gaatjie geplaas word.
· stadig en bestendig die monsters uit. Die pipetpunt word bo die puntmonstergat geplaas, en die monster sal in die gat sink. Laat die monster sink om die monstergat te vul in plaas daarvan om in te druk.
· Sodra die laaste druppel monster met vloeistofkop is, sal die vloeistof na die tweede been beweeg, die vloeistof stadig verhoog en uit die buffer beweeg.

Hoe om vertikale gommonsterneming te doen?

· vertikale gompuntmonstergate wat tussen twee stukke glas gevorm word. In baie dun gom kan die pipetkop nie eers tussen twee glasplate geplaas word nie. Pasop vir die gliserien! Plaas die pipetkop oor die monstergat en die monster sal in die gat sink.
· puntmonster voor, maak seker dat die vertikale punt van polipropileen-asielgelmonstergat skoongespoel word. Was die ongepolimeriseerde akrielamied en die water wat onderaan die monstergat mag verskyn, weg. Die water kan die monstergat aansienlik kleiner maak. Gebruik 'n 25 ml of 50 ml spuit en 'n 18-gauge naald. Gooi die elektroforesebuffer in en spoel die monstergat versigtig.
· dit kan moeilik wees om die monstergat te sien, maar terselfdertyd is die res maklik. Indien daar oortollige gate is, kan die monsterbuffer met bromofenolblou getoets word.