Voorsorgmaatreëls vir polyacrylamide gel elektroforese

· polyacrylamideGel moet deur akrielamied monomeer, polimerisasie -beginmateriaal, katalisator en die reg van sout- en buffermengsel saam.

· akrielamieden bis (n, n '- metileen dubbele akrielamied) is die monomeer vorm gelmatriks.

· Ammonium -persulfaat begin kleefpolimerisasieproses. Die formulering van die gom benodig 10% ammoniumpersulfaatoplossing wat in water voorberei word. Die meeste van die inligting dui op 'n behoefte aan aktiewe gebruik. Die oplossing van 10% kan egter vir 'n paar weke op 4 ℃ geplaas word sonder 'n beduidende verlies aan aktiwiteit. Maak tot 10 ml en gooi weg as die gom nie saamgevoeg nie.

Wenk: die persentasie vanakrielamiedIn opeenvolging van gom en proteïengom is nie dieselfde nie. As u die voorste akrielamied: BIS -oplossing gebruik, moet u die regte bottel kry.

· Temed (n, n, n ', n'- tetrametieletielendiamien) is 'n katalisator in 'n bruin bottel wat in die yskas geplaas word. Voeg net voor die gom gom.

· Polyacrylamide -elektroforese gebruik glas in elektroforese moet voor en na elke keer gewas word. Na elektroforese, was met 'n sagte kwas en lap in warm seepwater, spoel met gedistilleerde water en staan ​​om droog te word.

· Vog en stof kan met hol polimeer veroorsaak. Maak die glasplaat skoon met 'n glasskoonmaker en vee dit met 'n sagte kwas voor. Was met gedistilleerde water en droog deeglik met 'n papiervee. As u met 70% etanol spoel voordat u met papier vee, help dit om die droog skoon te maak en te bespoedig. Voeg monsters van akrielamied agtereenvolgens by: bis, water, bufferoplossing, ammoniumpersulfaat, temed. Skud goed en giet onmiddellik.

Dit is nie nodig om polyacrylamide voor polimerisasie te degass nie. (Acrylamide word vroeër in 'n vakuum geplaas om borrels te verwyder omdat suurstof polimerisasie belemmer.)

Horisontale gompuntmonsterwenke.

· Sit 'n stuk swart papier in die onderste boks, swart agtergrond om 'n voorbeeldgat te maak om duideliker te sien.
· Gom -tenk gevulde buffer, net oor die kolloïed.
· As die rand 'n lig het, skakel die ligte aan, laat lig skyn kolloïed. Trek die monster in die pipet.
· Gebruik outomatiese pipetapparaat.
· In 10-200 mu 1 vloeistofbewegingspunt kan in die meeste punte op die monster gebruik word. Vir baie klein monstergate (minder as 10μ1) is die lang pipetkop wat gebruik word vir die opeenvolging van gom geriefliker.

· Pipetting is net in die monster gedompel en inaseming stadig beweeg vloeistof. Die monster kan klewerig lyk met gliserien, en vinnige pomp kan lugborrels in die pipetkop trek.

· Monsters na die inaseming van die pipetkop, sal die vloeistofkop saggies op die rand van die pyp beweeg of die papiervelvloeistofkop buite die druppels suig. Wees versigtig om nie die monster te suig nie.

Plaas die monster in die monstergat

· Pipetapparaat om 'n bietjie druk te hou, laat die monsters effens beweeg oorvloei vloeistofkop.
· Die pipetkop wat in die buffer geplaas is, effens hoër as die plekgate, handhaaf positiewe druk. Die punt van die pipet kan in 'n klein gaatjie geplaas word.
· Die monsters stadig en geleidelik uit. Die pipetpunt word bo die puntmonstergat geplaas, en die monster sal in die gat sink. Laat die monster sink om die monstergat te vul in plaas daarvan om in te druk.
· Sodra die laaste druppel monster met vloeistofkop, sal vloeistof na die tweede been beweeg, die vloeistof beweeg stadig, beweeg uit die buffer

Hoe om vertikale gommonsterneming te doen?

· Vertikale gompuntmonstergate wat tussen twee glasstukke gevorm is. In baie dun gom kan die pipetkop nie eens tussen twee glasplate geplaas word nie. Kyk na die Glycerin! Sit die pipetkop oor die monstergat en die monster sal in die gat sink.
· Puntmonster Voorheen, maak seker dat u die vertikale punt van polipropileen -asielgelmonstergat skoon maak, word skoon afgespoel. Was die onpolymeriseerde akrielamied weg en die water wat aan die onderkant van die monstergat kan voorkom. Die water kan die monstergat aansienlik kleiner maak. Gebruik 'n spuit van 25 ml of 50 ml en 'n naald van 18 meter. Giet die elektroforese -buffer in en spoel die monstergat versigtig.
· Dit kan moeilik wees om die steekproefgat te sien, maar dieselfde is die res maklik. As daar oortollige gate is, kan die monsterbuffer met bromofenolblou getoets word.