Voorsorgmaatreëls vir poliakrielamiedgelelektroforese

· poliakrielamiedgel moet deur akrielamied monomeer, polimerisasie beginmateriaal, katalisator, en die reg van sout en buffer mengsel saam.

· akrielamieden BIS (N, N '- metileen dubbel akrilamied) is die monomeer vorm jel matriks.

· ammoniumpersulfaat begin gom polimerisasie proses. Die formulering van die gom vereis 10% ammoniumpersulfaatoplossing wat in water voorberei is. Die meeste van die inligting het 'n behoefte aan aktiewe gebruik aangedui. Die 10% oplossing kan egter vir 'n paar weke by 4 ℃ geplaas word sonder beduidende verlies aan aktiwiteit. Vul aan tot 10 ml en gooi weg wanneer die gom nie saamvoeg nie.

Wenk: Die persentasie vanakrielamiedin volgordebepaling gom en proteïen gom is nie dieselfde nie. As u voorafgemaakte akrielamied: BIS-oplossing gebruik, maak seker dat u die regte bottel kry.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametiel etileendiamien) is 'n katalisator, in 'n bruin bottel, wat in die yskas geplaas word. Voeg by net voordat gom gegooi word.

· poliakrielamiedelektroforese wat gebruik word in elektroforese moet voor en na elke keer gewas word. Na elektroforese, was met 'n sagte kwas en lap in warm seepwater, spoel uit met gedistilleerde water en staan ​​om droog te word.

· vog en stof kan veroorsaak met hol polimeer. Voor elektroforese, maak die glasplaat skoon met glasskoonmaker en vee dit met 'n sagte kwas af. Was met gedistilleerde water en droog deeglik met 'n papierdoek. Om met 70% etanol af te spoel voordat dit met papier afgevee word, help om skoon te maak en droog te bespoedig. Voeg monsters van akrielamied agtereenvolgens by: BIS, water, bufferoplossing, ammoniumpersulfaat, TEMED. Skud goed en gooi dadelik.

Dit is nie nodig om poliakrielamied voor polimerisasie te ontgas nie. (Akrilamied is vroeër in 'n vakuum geplaas om borrels te verwyder omdat suurstof polimerisasie inhibeer.)

Horisontale gompunt monster wenke.

· sit 'n stuk swart papier in die onderste boks, swart agtergrond om 'n voorbeeldgat te maak om duideliker te sien.
· gomtenk gevulde buffer, net oor die kolloïed.
· as die rand 'n lig het, skakel die ligte aan, laat lig kolloïed skyn. Trek die monster in die pipet.
· die gebruik van outomatiese pipetapparaat.
· in 10-200 mu 1 vloeistof bewegende punt kan gebruik word in die meeste van die punte op die monster. Vir baie klein monstergate (minder as 10μ1), is die lang pipetkop wat gebruik word vir die volgorde van gom, geriefliker.

· pipettering wat pas in die monster gedompel is, wat stadig bewegende vloeistof inasem. Die monster kan taai lyk met gliserien, en vinnige pomp kan lugborrels in die pipetkop trek.

· monsters na inaseming pipet kop, sal vloeistof kop liggies beweeg op die rand van die pyp of vee papier suig vloeistof kop buite die druppels. Wees versigtig om nie die monster te suig nie.

Plaas die monster in die monstergat

· pipetteer toestel 'n bietjie druk te hou, maak die monsters effens beweeg oorloop vloeistof kop.
· die pipetkop wat in die buffer geplaas word, effens hoër as die kolgate, handhaaf positiewe druk. Die punt van die pipet kan in 'n klein gaatjie geplaas word.
· stadig en bestendig die monsters uit. Die pipetpunt word bo die puntmonstergat geplaas, en die monster sal in die gat sink. Laat die monster sink om die monstergat te vul in plaas daarvan om in te druk.
· sodra die laaste druppel monster met vloeistofkop, vloeistof na die tweede been beweeg, stadig die vloeistof beweeg, beweeg uit buffer

Hoe om vertikale gommonster te neem?

· vertikale gompuntmonstergate wat tussen twee stukke glas gevorm word. In baie dun gom kan die pipetkop nie eers tussen twee glasplate ingesit word nie. Kyk na die gliserien! Plaas die pipetkop oor die monstergat en die monster sal in die gat sink.
· punt monster voor, maak seker dat die vertikale punt van polipropileen asiel gel monster gat is skoon gespoel. Was die ongepolimeriseerde akrielamied en die water wat aan die onderkant van die monstergat mag voorkom, weg. Die water kan die monstergat aansienlik kleiner maak. Gebruik 'n 25 ml of 50 ml spuit en 'n 18-gauge naald. Gooi die elektroforesebuffer in en spoel die monstergat versigtig uit.
· dit kan moeilik wees om die monstergat te sien, maar terselfdertyd is die res maklik. As daar oortollige gate is, kan die monsterbuffer met broomfenolblou getoets word.